Авторы

Для создания модели нарушения эмбрионального развития мышей использовалось стандартное вещество цитозинарабиноза (Ara-c), которое является ингибитором синтеза ДНК и обладает сильным цитотоксическим свойством в отношении делящихся клеток. Вещество вводилось в критический период развития коры мозга мышей. Изучались последствия введения Ara-c на 12,5-13,5 пренатальные сутки и на 13,5-14,5 пренатальные сутки в отношении соматосенсорного развития у мышей в постнатальный период. Для тестирования потомства использовали модифицированную батарею Фокса. В результате работы было показано, что такая разница в сроках введения вещества приводит к разным нейротоксическим нарушениям у потомства, обнаруженным в ряде сенсомоторных тестов. Данная модель позволяет проводить тонкий анализ нейротоксического действия новых фармакологических веществ на эмбриональное развитие мышей.

Проведено радиотелеметрическое исследование влияния разных доз нового синтетического фрагмента рецепторсвязывающего домена аполипопротеина Е — пептида COG1410. Тест-системой служили мыши CD-1, которым имплантировали телеметрические датчики. Показано гипотензивное действие дозы пептида 6 мг/кг, что превышает терапевтическую дозу в 10 раз. Полученные результаты радиотелеметрического исследования позволяют прогнозировать побочное действие пептида COG1410 на сердечно-сосудистую систему при передозировке.

В опытах на мышах CD-1 обнаружено дозозависимое нейротоксическое действие зервамицинов. Нейротоксические эффекты в дозе 0,5 мг/кг не выявлены. Доза 2 мг/кг является пороговой в проявлении нейротоксических свойств. Нейротоксическое действие зервамицинов носит обратимый характер. Zrv-IIB вызывает более выраженные нейротоксические эффекты, чем Zrv-IIА.

Организация, занимающаяся изучением безопасности химических веществ, биотехнологических и нанотехнологических продуктов в соответствии с правилами GLP (надлежащая лабораторная практика), должна иметь службу обеспечения качества, которая назначается менеджментом из числа сотрудников, не участвующих в исследованиях, и призванная проводить независимую оценку полноты соблюдения требований GLP. Служба обеспечения качества должна быть знакома с процедурами проведения исследований и подотчетна непосредственно руководству исследовательской организации.

В соответствии с правилами надлежащей лабораторной практики руководством исследовательской организации назначается руководитель исследования для проведения токсикологических испытаний. Руководителем исследования может быть научный сотрудник или иной специалист, имеющий необходимый уровень образования, квалификацию и опыт работы. Руководитель исследования несет персональную ответственность за выполнение испытания и итоговый отчет. Он осуществляет общий контроль над проведением исследования.

Одной из важных задач экспериментальных биомедицинских исследований является то, в какой степени результаты, полученные на лабораторных животных можно экстраполировать на организм человека. От того, насколько модель на лабораторных животных будет адекватна патологическим процессам в организме человека, зависит формирование представлений о механизмах физиологических процессов, ответственных за реализацию действия фармакологических препаратов, и стратегия выбора новых химических веществ с определенными фармакологическими свойствами. Повышенный симпатический тонус сердца и сосудов, пониженая чувствительность барорефлекса, участие Y-хромосомы и митохондриальной ДНК в наследуемости высокого уровня АД, возможность фармакологической коррекции АД с помощью моксонидина (гипотензивного препарата центрального действия) указывают на то, что спонтанно-гипертензивные крысы, имеющие АД диастолическое около 150 мм рт.ст. и систолическое около 200 мм рт.ст., являются адекватной экспериментальной моделью для изучения лекарственных средств коррекции артериальной гипертонии.

Иммунодефицитным мышам линии Nu/Nu B/C и SCID CB-17 подкожно вводили опухолевую клеточную культуру Rhabdomyosarcoma человека для создания биомодели позитивного контроля. Для усиления подавления иммунитета группе мышей Nu/Nu B/C перед введением опухолевой клеточной культуры вводили Cyclophosphamide. Было показано, что после введения клеточной культуры Rhabdomyosarcoma человека у мышей Nu/Nu B/C сформировались опухоли альвеолярного типа, а у мышей SCID CB-17 эмбрионального типа с частичной дифференцировкой опухолевых клеток в остеобласты с формированием участков хрящевой ткани по типу гиалинового хряща. У мышей Nu/Nu B/C, которым Cyclophosphamide не вводился, в области введения клеточной культуры Rhabdomyosarcoma новообразования не сформировались. Было показано, что после введения Cyclophosphamide у мышей Nu/Nu B/C отмечены выраженные дегенеративные изменения в лимфоидной ткани. Результаты морфологического анализа позволили прийти к заключению, что после введения опухолевой клеточной культуры Rhabdomyosarcoma человека иммунодефицитным мышам линии Nu/Nu B/C и SCID CB-17 у мышей не сформировались опухоли с высокой степенью малигнизации.

Проведено исследование биобезопасности трех клеточных культур мезенхимальных стромальных клеток (МСК) человека, выделенных из жировой ткани (МСК ЖТ) и двух культур МСК человека, выделенных из костного мозга (МСК КМ) на иммунодефицитных мышах линии Nu/Nu В/С. В качестве позитивного контроля была использована опухолевая клеточная культура Rhabdomyosarcoma человека. В целях усиления подавления иммунитета перед введением тестируемых клеточных культур МСК и опухолевой клеточной культуры Rhabdomyosarcoma мышам вводился Cyclophosphamide. У ряда мышей после введения двух клеточных культур МСК ЖТ и клеточных культур МСК КМ в области введения сформировались морфологические структуры в виде инфильтратов без признаков малигнизации. Метастазирование органов и лимфоузлов клетками с признаками малигнизации, а также патоморфологические признаки отклонения от нормы в исследуемых органах не обнаружены ни у одной мыши Nu/Nu В/С. Результаты гистологического анализа показали, что тестируемые на биобезопасность МСК не обладают туморогенным потенциалом.

Все работы с биомоделями при проведении доклинических испытаний необходимо выполнять в соответствии с международными правилами, которые призваны регламентировать использование лабораторных животных в биомедицинских исследованиях. Доклинические исследования с использованием лабораторных животных должны быть обоснованы с позиции их значимости для решения задач, направленных на улучшение здоровья человека или самих животных, прогресса науки в целом, а также общественной пользы. Гуманное обращение с животными и их рациональное использование являются основополагающими принципами политики проведения таких исследований. Исключение или сведение до минимума дискомфорта, страданий и боли у животных во время проведения эксперимента являются обязательными требованиями.

Результат определения МТД для зервамицинов не выявил достоверных различий между Zrv-IIA и Zrv-IIB. По результатам исследования зервамицин может быть отнесен ко 2-му классу токсичности (2>ЛД50>20 мг/кг) для мышей CD-1. Пептидный антибиотик ареницин, в отличие от зервамицинов, может быть отнесен к 3-му классу токсичности (20>ЛД50>700 мг/кг) для мышей CD-1. Пептидный антибиотик аурелин проявляет выраженную токсическую картину в дозе 75 мг/кг, сопровождающуюся гибелью экспериментального животного. Однако в дозе 50 мг/кг гибель не наблюдалась, что позволяет предварительно отнести исследуемый пептидный антибиотик к 3-му классу токсичности для мышей CD-1.

Проведены доклинические исследования острой и хронической токсичности гексапептида HLDF-6 из фактора дифференцировки человеческих лейкоцитов при его внутрибрюшинном введении самцам и самкам мышей CD-1 и внутримышечном введении самцам и самкам крыс CD. Определен класс токсичности HLDF-6. Установлено, что многократное, на протяжении 14 дней, введение HLDF–6 внутримышечно в дозе 10 мг/кг является безопасным, побочные эффекты не наблюдаются.